細胞培養中無(wú)菌操作技術(shù)

細胞培養中的無(wú)菌技術(shù)：

1. 實(shí)驗進(jìn)行前，無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺（laminar flow） 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作臺面，并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺風(fēng)扇運轉10 分鐘后，才開(kāi)始實(shí)驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實(shí)驗完畢后，將實(shí)驗物品帶出工作臺，以70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作臺面。操作間隔應讓無(wú)菌操作臺運轉10分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細胞株的操作。

2. 無(wú)菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗用品用完即應移出，以利于氣流之流通。實(shí)驗用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺內。實(shí)驗操作應在臺面的*無(wú)菌區域，勿在邊緣的非無(wú)菌區域操作。

3. 小心取用無(wú)菌的實(shí)驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口，亦不要在打開(kāi)的容器正上方操作實(shí)驗。容器打開(kāi)后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

4. 工作人員應注意自身的安全，須穿戴實(shí)驗衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗。對于來(lái)自人類(lèi)或是病毒感染的細胞株應特別小心操作，并選擇適當等級的無(wú)菌操作臺（至少Class II）。操作過(guò)程中，應避免引起aerosol 的產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖銳針頭的傷害等。

5. 定期檢測下列項目：

5.1. CO2 鋼瓶的CO2 壓力

5.2. CO2 培養箱的CO2 濃度、溫度、及水盤(pán)是否有污染（水盤(pán)的水用無(wú)菌水，每周更換）。

5.3. 無(wú)菌操作臺內的airflow 壓力，定期更換紫外線(xiàn)燈管及HEPA 過(guò)濾膜，預濾網(wǎng)（300小時(shí)/預濾網(wǎng)，3000 小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽可添加消毒劑（Zephrin 1:750），定期更換水槽的水。